Количествено определяне NAD + и неговите метаболити в миши седалищни нерви

Въвеждането

Ключовите части на никотинамид аденин динуклеотид (NAD +) и неговите метаболити в стареенето и невродегенерацията са широко признати. За да се стимулира напредъкът към биохимични изследвания и интервенции, насочени към стареенето и невродегенеративните заболявания, е от голямо значение точно да се определи количествено NAD + и неговите метаболитни нива в спасителния път на NAD +. Тук се прилага стабилен и точен LC-MS/MS метод за количествено определяне на нивата на NAD + и неговите метаболити в нормален и увреден седалищен нерв при мишки.

Ограничения на съществуващите методи за количествено определяне на NAD+ и неговите метаболити

Традиционните методи за количествено определяне на NAD + и неговите метаболити, като HPLC-UV, NMR, електрофореза на капилярната зона или колориметрични ензимни анализи, са изправени пред различни предизвикателства в чувствителността, селективността и непрякото измерване. Що се отнася до съществуващите LC-MS/MS тестове за клетъчни или тъканни NAD + и неговите метаболитни измервания, все още има много трудности за преодоляване, като удължено време на работа, лошо поведение на задържане на хроматографията и незадоволителни пикови форми. Освен това само едно до три вещества в пътя на спасяване на NAD + могат да бъдат обхванати от тези методи.

Модификациите на метода LC-MS/MS

Въз основа на съществуващите LC-MS/MS анализи се провеждат модификациите по отношение на хроматографските условия, сурогатната матрица и условията на MS/MS. По-конкретно, 5 μM метилен фосфонова киселина се използва като мобилна фазова добавка, която изрично насърчава интензитета на сигнала и пиковата форма. Като се има предвид относително чистата и проста природа на никога пробите и техния малък размер, ултрачистата вода се тества като заместваща матрица. Вместо хидрофилно взаимодействие течна хроматография колона и hypercarb колона, Waters Atlantis Premier BEH C18 AX колона се използва, чиято уникална MaxPeak HPS високоефективна повърхностна технология (пасивиране на вътрешната стена на колоната, премахване на металната повърхност) позволява висока възпроизводимост, пикова симетрия и базово разделяне на всички аналити.Освен това, условията на MS са оптимизирани, за да се сведе до минимум сигналът за смущения NAD + в канала на цикличната аденозин дифосфат рибоза (cADPR), като същевременно се поддържа реакцията на cADPR и никотинамид мононуклеотид (NMN), с 4000V за напрежение на йонен спрей, 450 ° C за температура на турбо нагревателя, 50 psi за газ 1, 50 psi за газ 2, 30 psi за газ завеса и 12 psi за газ за сблъсък.

Представителна хроматограма на нервни проби (нормални срещу увредени)

Всичките пет аналита постигат изходно разделяне, където cADPR е чувствителен биомаркер в модела на невродегенерация. Тук аксотомията на седалищния нерв предизвиква аксонална дегенерация, което води до намалено ниво на NAD + и повишено ниво на NMN в увредените нерви, което води до около 2-кратно увеличение на съотношението NMN / NAD +. Едновременно с това нивата на никотинамид (NAM) и аденозин дифосфат рибоза (ADPR) намаляват с около 2 пъти, докато нивото на cADPR се увеличава повече от 8 пъти. Тези резултати са в съответствие с тези от по-рано докладвани изследвания, потвърждавайки точността на този модифициран LS-MS/MS метод при количественото определяне на NAD + и неговите метаболити.

Извод

Този модифициран метод LC-MS/MS позволява ефективно разделяне на NAD +, NMN, NAM, ADPR и cADPR в рамките на кратко време на изпълнение от 5 минути, което допринася за ранното диагностициране на различни неврологични заболявания и разработването на лекарства за стареене и невродегенеративни заболявания.

Препратка

Ma Y, Deng L, Du Z. Разработване и валидиране на LC-MS/MS метод за количествено определяне на NAD + и свързаните с него метаболити в седалищните нерви на мишки и приложението му към животински модел на увреждане на нервите. J Хроматогр А. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821

БОНТАК НАД

БОНТАКе посветена на научноизследователската и развойна дейност, производството и продажбата на суровини за коензим и природни продукти от 2012 г. насам, със собствени фабрики, над 170 глобални патента, както и силен екип за научноизследователска и развойна дейност. BONTAC има богат опит в научноизследователската и развойна дейност и съвременни технологии в биосинтезата наNAD и неговите прекурсори(напр. NMN и NR). Има различни видове NAD, които трябва да бъдат избрани, включващи NAD ER клас (отстраняване на ендоксин), NAD степен I (IVD / хранителна добавка / козметика суров прах), NAD клас II (API / междинни продукти) и NAD клас IV (ако има по-високи изисквания за разтворимост), които могат да бъдат предоставени под формата на лиофилизиран прах или кристален прах. Чистотата на BONTAC NAD може да достигне над 98%.

Отричане

Тази статия се основава на справката в академичното списание. Съответната информация се предоставя само за целите на споделянето и ученето и не представлява никакви медицински съвети. Ако има някакво нарушение, моля, свържете се с автора за изтриване. Мненията, изразени в тази статия, не представляват позицията на BONTAC. При никакви обстоятелства BONTAC няма да бъде държан отговорен или отговорен по никакъв начин за каквито и да е искове, щети, загуби, разходи или разходи, произтичащи или произтичащи пряко или косвено от това, че разчитате на информацията и материалите на този уебсайт.