Количествено определяне на NAD+ и неговите метаболити в седалищните нерви на мишите

Въвеждането

Ключовите части на никотинамид аденин динуклеотид (NAD+) и неговите метаболити при стареене и невродегенерация са широко признати. За да се стимулира напредъкът към биохимични изследвания и интервенции, насочени към стареенето и невродегенеративните заболявания, е от голямо значение да се определи точно количествено NAD+ и нивата на метаболитите в пътя на спасяване на NAD+. Тук се прилага стабилен и точен метод LC-MS/MS за количествено определяне на нивата на NAD+ и неговите метаболити в нормален и увреден седалищен нерв на мишка.

Ограничения на съществуващите методи за количествено определяне на NAD+ и неговите метаболити

Традиционните методи за количествено определяне на NAD+ и неговите метаболити, като HPLC-UV, NMR, електрофореза на капилярната зона или колориметрични ензимни анализи, са изправени пред различни предизвикателства в чувствителността, селективността и косвеното измерване. Що се отнася до съществуващите LC-MS/MS тестове за измерване на клетъчния или тъканен NAD+ и неговите метаболити, все още има много трудности за преодоляване, като удължено време за работа, лошо хроматографско задържащо поведение и незадоволителни пикови форми. Освен това само едно до три вещества в пътя на спасяване на NAD+ могат да бъдат обхванати от тези методи.

Модификациите на метода LC-MS/MS

Въз основа на съществуващите LC-MS/MS тестове се извършват модификации по отношение на хроматографските условия, сурогатната матрица и условията на MS/MS. По-конкретно, 5 μM метиленфосфонова киселина се използва като мобилна фазова добавка, която изрично насърчава интензитета на сигнала и пиковата форма. Като се има предвид относително чистата и проста природа на пробите никога и малкия им размер, свръхчистата вода се тества като заместителна матрица. Вместо колона за течна хроматография с хидрофилно взаимодействие и хиперкарбюраторна колона, се използва колоната Waters Atlantis Premier BEH C18 AX, чиято уникална високоефективна повърхностна технология MaxPeak HPS (пасивиране на вътрешната стена на колоната, елиминиране на металната повърхност) позволява висока възпроизводимост, пикова симетрия и базово разделяне на всички аналити.Освен това, условията на MS са оптимизирани, за да сведат до минимум сигнала за смущения NAD+ в цикличния канал на аденозин дифосфат рибозата (cADPR), като същевременно се поддържа реакцията на cADPR и никотинамид мононуклеотид (NMN), с 4000V за напрежение на йонно пръскане, 450 °C за температура на турбо нагревателя, 50 psi за газ 1, 50 psi за газ 2, 30 psi за завеса газ и 12 psi за сблъсък газ.

Представителна хроматограма на нервни проби (нормални срещу увредени)

И петте аналита постигат изходно разделяне, където cADPR е чувствителен биомаркер в модела на невродегенерацията. Тук аксотомията на седалищния нерв индуцира дегенерация на аксоните, което води до намалено ниво на NAD+ и повишено ниво на NMN в увредените нерви, което води до около 2 пъти увеличение на съотношението NMN/NAD+. Едновременно с това нивата на никотинамид (NAM) и аденозин дифосфат рибоза (ADPR) се понижават около 2 пъти, докато нивото на cADPR се повишава повече от 8 пъти. Тези резултати са в съответствие с тези от докладвани по-рано изследвания, които проверяват точността на този модифициран метод LS-MS/MS при количествено определяне на NAD+ и неговите метаболити.

Извод

Този модифициран метод LC-MS/MS позволява ефективно изходно разделяне на NAD+, NMN, NAM, ADPR и cADPR в рамките на кратко време от 5 минути, което допринася за ранната диагностика на различни неврологични заболявания и разработването на лекарства за стареене и невродегенеративни заболявания.

Препратка

Ma Y, Deng L, Du Z. Разработване и валидиране на LC-MS/MS метод за количествено определяне на NAD+ и свързаните с него метаболити в седалищните нерви на мишки и приложението му към животински модел с нервно увреждане. J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821

БОНТАК НАД

БОНТАКе посветена на научноизследователската и развойна дейност, производството и продажбата на суровини за коензими и натурални продукти от 2012 г., със собствени фабрики, над 170 световни патента, както и силен екип за научноизследователска и развойна дейност. BONTAC има богат опит в научноизследователската и развойна дейност и модерни технологии в биосинтезата наNAD и неговите предшественици(напр. NMN и NR). Има различни видове NAD, които трябва да бъдат избрани, обхващащи клас NAD ER (отстраняване на ендоксин), NAD степен I (IVD/хранителна добавка/суров прах козметика), NAD степен II (API/междинни продукти) и NAD степен IV (ако има по-високи изисквания за разтворимост), които могат да бъдат предоставени под формата на лиофилизиран прах или кристален прах. Чистотата на BONTAC NAD може да достигне над 98%.

Отричане

Тази статия се основава на препратката в академичното списание. Съответната информация се предоставя само за целите на споделянето и обучението и не представлява медицински съвети. Ако има някакво нарушение, моля, свържете се с автора за изтриване. Мненията, изразени в тази статия, не представляват позицията на BONTAC. При никакви обстоятелства BONTAC няма да носи отговорност по какъвто и да е начин за каквито и да било искове, щети, загуби, разходи или разходи, произтичащи или произтичащи пряко или косвено от вашето разчитане на информацията и материалите на този уебсайт.