Изключителни предимства на ултрачувствителния ELISA с циклиране на Thio-NAD при определяне на протеин Денга NS1
1. Въведение
Денга треската е остро инфекциозно заболяване, причинено от Денга вирус чрез ухапване на заразен вид Aedes (Ae. aegypti или Ae. albopictus) комар, с основни симптоми като висока температура, световъртеж, главоболие, обрив и Тежки болки (болки в окото, мускулите, ставите или костите) и др. Това заболяване е широко разпространено в тропически и субтропични климатични райони. Около 100 до 400 милиона души се заразяват всяка година, като над 80% обикновено са леки и безсимптомни. Въпреки това, тежката Денга треска може да увеличи риска от смърт, ако не се лекува правилно. Затова ранната диагноза на това заболяване е от съществено значение за навременното му лечение.Забележително е, че неструктурният протеин 1 (NS1), силно консервиран гликопротеин, се секретира главно по време на инфекцията на Денга вирус, който се счита за основен патогенезен фактор на Денга треска. Затова NSI обикновено се използва като биомаркер за ранно откриване на това заболяване.
In thе study, a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) в комбинация с Тио никотинамид аденин динуклеотид (THIO-NAD/S-NAD) Метод на циклиране (оттук нататък ултрачувствителен ELISA) се използва за откриване на NSI, последвано от сравнение с NAAT за потвърждаване на точността на откриването.
2. Предимства и недостатъци на традиционните методи за откриване за Денга треска
В момента tЕто четири основни метода за откриване за Денга треска.
Вирусна изолация и идентификацията имат висока специфичност, но отнемат време и отнема поне 5 дни. The Бърз антиген Тестът е най-бързият и най-икономичен сред другите методи, но чувствителността и специфичността са сравнително ниска. Серологичният тест, базиран на IgM и IgG, е ограничен от броят на дните на инфекция, като The Тестът трябва да бъде отложен до повишаване на нивото на антителата издига се до забележимо ниво.
В клиничната практика често се прилага NAAT за определяне Денга треска от мръсотията на високата си чувствителност и специфичност. Въпреки това, този метод е скъп, трудоемък и склонен към фалшива позитивност, която трябва да се прилага от обучения персонал. За да се преодолеят недостатъците на тези методи, е създаден нов метод за откриване ултрачувствителен ELISA е приложен в това изследване.
3. Работен процес на ултрачувствителна ELISA с циклиране на thio-NAD
Двойка антитела е използва се за улавяне на NS1 протеина в сандвича ELISA и алкалната фосфатаза е labeled on The secondary antibody. Aside from The antibodies, an androsterone derivative, 3α-hydroxysteroid dehydrogenase, thio-NAD, and NADH са използва се за конструиране на системата за циклиране на ензими тио-NAD. По време на реакцията на циклиране на тио-NAD, тио-NADH постоянно се натрупваше в триъгълен числен вид и можеше да бъде директно измерен при абсорбция от 405 nm.
4. Сравнение на ултрачувствителния ELISA и NAAT при откриването на протеин Денга NS1
В NAAT 60 екземпляра са положителни към денга, а 25 са отрицателни към денга. Стойността на прага на циклиране на NAAT (CT) на тези проби с положителен за денга варираше от 12.42 до 31.41. В ултрачувствителния ELISA, 59 проби са съответно положителни спрямо резултатите от NAAT, докато 25 са напълно отрицателни на резултатите от NAAT.В сравнение с NAAT, чувствителността и специфичността на ултрачувствителния ELISA са съответно 98,3% и 100% (Таблица 2). От 60 потвърдени с NAAT проби пациенти с положителна денга, само 1 е отрицателен в ултрачувствителния ELISA. Данните от NAAT показаха, че пробата е случай на инфекция тип 4 DENV с CT стойност 21.59. Резултатите от ултрачувствителния ELISA са почти в съвпадение с резултатите на NAAT, с капа стойност 0.972 (95% CI: 0.917-1.0).
5. Заключение
Ultrasensitive ELISA методът е лесен за изпълнение и не изисква професионални стажанти за работа. TОткриването може да се започне веднага след получаване на малка проба. Особено подходящ е за ранно откриване на Денга заболяване при Страни с ниски доходи.Референция
Chen, Po-Kai et al. “Advanced Detection Method за Денга NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling.” Viruses vol. 15,9 1894. 8 Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894Предимства и характеристики на продукта БОНТАК Тио-НАД/С-НАД
BONTAC Е Оедно от малкото предприятия в Китай които могат да произвеждат Thio-NAD, с “Bonzyme” Метод на цялостен ензим (Екологично чисто; Няма вредни остатъци от разтворител) и unique “Bonpure” seven-step purification technology. BONTAC intergrates R&D, production and sale, с самостоятелно притежавани фабрики и редица международни сертификати, за да се гарантира високо качество и стабилно доставка на продукти.
