Количествено определяне на NAD+ и неговите метаболити в седалищните нерви на мишките

Въвеждането

Ключовите части на никотинамид аденин динуклеотид (NAD+) и неговите метаболити при стареене и невродегенерация са широко признати. За да се стимулира напредъкът към биохимични изследвания и интервенции, насочени към стареенето и невродегенеративните заболявания, е от голямо значение точното количествено определяне на NAD+ и неговите метаболити в спасителния път на NAD+. Тук се прилага стабилен и точен метод LC-MS/MS за количествено определяне на нивата на NAD+ и неговите метаболити в нормален и увреден седалищен нерв на мишки.

Ограничения на съществуващите методи за количествено определяне на NAD+ и нейните метаболити

Традиционните методи за количествено определяне на NAD+ и неговите метаболити, като HPLC-UV, NMR, електрофореза на капилярната зона или колориметрични ензимни анализи, са изправени пред различни предизвикателства в чувствителността, селективността и индиректното измерване. Що се отнася до съществуващите LC-MS/MS тестове за клетъчен или тъканен NAD+ и неговите измервания на метаболитите, все още има много трудности за преодоляване, като удължено време на работа, лошо хроматографско поведение на задържане и незадоволителни форми на пикове. Освен това само едно до три вещества в спасителния път на NAD+ могат да бъдат обхванати от тези методи.

Модификациите на метода LC-MS/MS

Въз основа на съществуващите LC-MS/MS тестове се извършват модификациите по отношение на хроматографските условия, сурогатната матрица и условията на MS/MS. По-конкретно, 5 μM метиленфосфонова киселина се използва като добавка за подвижна фаза, която изрично насърчава интензитета на сигнала и формата на пика. Като се има предвид относително чистият и прост характер на пробите и малкият им размер, ултрачистата вода се тества като заместваща матрица. Вместо хидрофилна взаимодействаща течна хроматографска колона и колона Hypercarb се използва колоната Waters Atlantis Premier BEH C18 AX, чиято уникална високоефективна повърхностна технология MaxPeak HPS (пасивиране на вътрешната стена на колоната, елиминиране на металната повърхност) позволява висока възпроизводимост, пикова симетрия и разделяне на базовата линия на всички аналити.Освен това, условията на MS са оптимизирани за минимизиране на сигнала за смущения NAD+ в канала на цикличната аденозин дифосфатна рибоза (cADPR), като същевременно се поддържа реакцията на cADPR и никотинамид мононуклеотид (NMN), с 4000V за напрежение на йонно пръскане, 450°C за температура на турбонагревателя, 50 psi за газ 1, 50 psi за газ 2, 30 psi за газ завеса и 12 psi за газ при сблъсък.

Представителна хроматограма на нервни проби (нормални срещу наранени)

И петте аналита постигат изходно разделяне, където cADPR е чувствителен биомаркер в модела на невродегенерация. Тук аксотомията на седалищния нерв индуцира аксонална дегенерация, което води до намалено ниво на NAD+ и повишено ниво на NMN в увредените нерви, което води до около 2-кратно увеличение на съотношението NMN/NAD+. Едновременно с това нивата на никотинамид (NAM) и аденозин дифосфат рибоза (ADPR) се намаляват с около 2 пъти, докато нивото на cADPR се повишава с повече от 8 пъти. Тези резултати са в съответствие с тези от по-рано докладвани изследвания, потвърждаващи точността на този модифициран метод LS-MS/MS при количествено определяне на NAD+ и неговите метаболити.

Извод

Този модифициран LC-MS/MS метод позволява ефективно изходно разделяне на NAD+, NMN, NAM, ADPR и cADPR в рамките на кратко време от 5 минути, което допринася за ранно диагностициране на различни неврологични заболявания и разработване на лекарства за стареене и невродегенеративни заболявания.

Препратка

Ma Y, Deng L, Du Z. Разработване и валидиране на LC-MS/MS метод за количествено определяне на NAD+ и свързаните с него метаболити в седалищни нерви при мишки и приложението му към животински модел с увреждане на нерва. J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821

BONTAC NAD

BONTAC е посветена на научноизследователската и развойна дейност, производството и продажбата на суровини за коензимни и натурални продукти от 2012 г. насам, със собствени фабрики, над 170 глобални патента, както и силен екип за научноизследователска и развойна дейност. BONTAC има богат опит в научноизследователската и развойна дейност и модерни технологии в биосинтезата на NAD и неговите прекурсори (напр. NMN и NR). Има различни видове NAD, които трябва да бъдат избрани, обхващащи NAD ER клас (отстраняване на ендоксин), NAD клас I (IVD/хранителна добавка/козметика суров прах), NAD клас II (API/междинни продукти) и NAD клас IV (ако има по-високи изисквания за разтворимост), които могат да бъдат осигурени под формата на лиофилизиран прах или кристален прах. Чистотата на BONTAC NAD може да достигне над 98%.

Отричане

Тази статия се основава на препратката в академичното списание. Съответната информация се предоставя само за целите на споделянето и обучението и не представлява медицински съвет. Ако има някакво нарушение, моля, свържете се с автора за изтриване. Становищата, изразени в тази статия, не отразяват позицията на BONTAC. При никакви обстоятелства BONTAC няма да носи отговорност по какъвто и да е начин за искове, щети, загуби, разходи или разходи, произтичащи или произтичащи пряко или косвено от вашето разчитане на информацията и материалите на този уебсайт.